Exactitud ABtest40 y ABtest42 para muestras de plasma de 5 concentraciones diferentes. Cada punto representa el error relativo (RE, %) de cada una de las medidas realizadas. Las líneas discontinuas señalan el límite de conformidad establecido por las guías de validación (± 20 %), aunque en el caso de la muestra en el límite inferior de cuantificación (LLOQ) se acepta el ± 25 %.
La tabla muestra el límite inferior de cuantificación (LLOQ) determinado de acuerdo con las recomendaciones de la EMA y la FDA. Estos niveles están muy por debajo de los niveles promedio detectados en personas sanas y pacientes con AD.
El gráfico muestra la especificidad en las determinaciones de Aβ40 y Aβ42 determinada por la ausencia casi total de reactividad cruzada con otros péptidos similares a cada una de los péptidos diana.
Los valores de la ratio Aβ42/Aβ40 en plasma (TP42/40) medida con ABtest-IA presentan una correlación directa con los niveles de Aβ42 en el líquido cefalorraquídeo e inversa con la carga amiloide cortical medida mediante scanner de PET. (https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31787105).
La ratio Aβ42/Aβ40 medida con ABtest-IA es menor en los individuos con carga amiloide cortical por encima del nivel normal en PET-amiloide (Aβ+) que en los individuos con una carga por debajo del umbral (Aβ-). https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32179698).
La ratio Aβ42/Aβ40 en plasma predice la carga amiloide cerebral pudiendo llegar a discriminar individuos normales PET-amiloide positivos vs negativos con un área bajo la curva (AUC) de 0.896 entre las personas sin síntomas de deterioro cognitivo. (https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32179698).
Si el reclutamiento se lleva acabo directamente en base al nivel de PET-amiloide se necesitarían 500 escáneres mientras que si se introduce una pre-selección de los participantes en base a sus niveles plasmáticos de Aβ42/Aβ40 el número de escáneres de PET se reduciría a 208 para confirmar el resultado del test en plasma.
Esta estrategia de detección de dos pasos reduciría tasa de fallos de screening del 70% al ~ 28%, haciendo la participación en ensayos clínicos menos demandante para las personas y reduciendo sustancialmente la duración del periodo de screening y los costes asociados.
Adicionalmente, ABtest-ELISA permite determinar de forma diferenciada los niveles de la fracción de Aβ40 y Aβ42 que están libres en el plasma (FP40 y FP42) así como sus niveles totales (TP40 y TP42) en plasma.
La fracción libre (FP40 y FP42) obtenida mediante nuestro inmunoensayo se determina a partir de una muestra sin diluir y representa la fracción de esos péptidos que está directamente disponible en la muestra, libre de interacciones con otros componentes del plasma que impidan su inmuno-detección.
Los niveles totales (TP40 y TP42) se obtiene a partir de una alícuota de la misma muestra, diluida en un buffer patentado de modo que, junto con el libre, se mide también la fracción de esos péptidos que inicialmente estaba secuestrada para el ensayo por sus interacciones con otros componentes del plasma. En términos generales, la fracción libre representa solo en torno al 40% del péptido total cuantificado (TP42 y TP40).
